植物保護學院實驗教學中心

General Plant Pathology Experiment Ⅰ

學時：27學時 學分：1.5學分 課程性質(zhì)：必修

實驗個數(shù)：9個適用專業(yè)：植物保護專業(yè)、植物師范專業(yè)

課程代碼：BB009314

大綱執(zhí)筆人：張修國、李壯大綱審定人：

一、實驗課的性質(zhì)與任務(wù)（200－300字）

普通植物病理學實驗主要是配合植物病理學的教學內(nèi)容，幫助學生理解和掌握植物病理學的基

礎(chǔ)理論，學習基本知識和基本實驗技能的實驗指導課。內(nèi)容包括兩大部分，一是植物病害的癥狀識別和病原生物的形態(tài)特征觀察；二是有關(guān)病原物的分離、培養(yǎng)、接種、侵染過程觀察，病原物致病性和寄主抗病性鑒定，植物病害流行和防治等經(jīng)典植物病理學實驗及研究技術(shù)。第一部分一般安排在整個學期的教學過程中同步進行；第二部分則可根據(jù)具體情況安排，大多結(jié)合在教學實習中進行。著重訓練學生基本操作和技能，培養(yǎng)學生分析問題和解決問題能力；啟發(fā)和鼓勵學生的創(chuàng)新思維與開拓精神。

二、實驗?zāi)康呐c要求

普通植物病理學實驗內(nèi)容的安排是在部分重復(fù)微生物學的基礎(chǔ)上開始的，引導學生逐步進入植

物病理學的領(lǐng)域，并為以后深入學習病原生物學、農(nóng)業(yè)植物病理學、植病研究法、植物檢疫、植物病害防治等相關(guān)課程和進一步開展試驗研究打下堅實的基礎(chǔ)。同時，還適當增加了植物病理學研究的新方法、新技術(shù)。通過實驗，培養(yǎng)和提高學生觀察、思考和分析問題的能力；鍛煉學生獨立操作能力；使學生了解或掌握先進的技術(shù)和方法。啟發(fā)和鼓勵學生參與植物病理學研究及創(chuàng)新思維和開拓精神。

第一部分內(nèi)容是植物病害的癥狀識別和病原生物的形態(tài)特征觀察，安排在第二學年第一學期教學過程中進行。第二部分內(nèi)容是有關(guān)病原物的分離、培養(yǎng)、接種、侵染過程觀察，病原物致病性和寄主抗病性鑒定，植物病害流行和防治等經(jīng)典植物病理學實驗及研究技術(shù)。第二部分則可根據(jù)具體情況安排，部分內(nèi)容在教學過程同步進行，部分結(jié)合在教學實習中進行。每個實驗中材料和用具一項，主要是為指導教師在準備實驗時作參考的，教師課根據(jù)教學要求適當選擇，作業(yè)與思考是供學生復(fù)習時參考的。另外配套教材中增加了植物病理學研究的新技術(shù)、新方法，并根據(jù)當前植物病理學發(fā)展的新動向，為學有余力的學生開設(shè)了可供選作的實驗項目。有些實驗項目還為學生指出關(guān)鍵步驟和需注意的事項，繪制了試驗流程圖，使學生對實驗?zāi)軌蛘w理解，實驗前做到心中有數(shù)。要求學生每次實驗前要充分預(yù)習實驗指導，明確本次實驗的目的要求、原理和方法。每個實驗的具體要求如下：

三、實驗項目及內(nèi)容提要（一門課程開設(shè)兩個學期，應(yīng)填寫兩個表格）

第一學期實驗項目

四、實驗內(nèi)容安排

實驗一植物病害癥狀觀察　

1．目的要求

通過植物病害癥狀的觀察，學習描述和記載植物病害癥狀的方法，掌握植物病害的癥狀類型、特點以及了解癥狀在病害診斷中的作用。

2．實驗內(nèi)容

觀察所提供的植物病害的盒裝、浸漬、新鮮標本的癥狀類型，特點，并進行分類描述；植物病害病癥觀察及描述；了解癥狀在病害診斷中的作用。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、CD機、多媒體課件等）、各種類型的病害標本、幻燈片和掛圖等。擴大鏡、小刀及記載用具等。

實驗二　植物病原菌物一般形態(tài)觀察及臨時玻片制備

1．目的要求

通過觀察，認識病原菌物的營養(yǎng)體及其變態(tài)，認識菌物的子實體、有性繁殖、無性繁殖產(chǎn)生的各種類型孢子。

2．實驗內(nèi)容

植物病原菌物營養(yǎng)體、營養(yǎng)體的變態(tài)、繁殖體的觀察；植物病原菌物有性孢子和無性孢子形態(tài)觀察；學習植物病害臨時玻片的制作、繪制病原菌物一般形態(tài)草圖。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、CD機、多媒體課件等）、冰箱、生化培養(yǎng)箱、顯微鏡、各種類型的病害標本、幻燈片和掛圖等、挑針、刀片、木板、酒精燈、火柴、載玻片、蓋玻片、紗布、乳酚油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。

實驗三根腫菌門、卵菌門、壺菌門菌物及所致病害

1．目的要求

通過實驗要求了解根腫菌門、卵菌門、壺菌門菌物的主要形態(tài)特征，掌握與植物病害有關(guān)的重要屬的形態(tài)特征、分類依據(jù)及所致病害的癥狀特點，同時學習使用檢索表來鑒定病菌，為分類鑒定打下初步基礎(chǔ)。

2．實驗內(nèi)容

根腫菌屬：蕓苔根腫菌（Plasmodiophora brassicae）、多粘霉屬：禾谷多粘霉（Polymyxa graminis）、節(jié)壺菌屬：玉米褐斑病菌（Physoderma maydis）、綿霉屬：水稻爛秧綿霉菌（Achlya spp.）、腐霉屬：瓜果腐霉菌（Pythium aphanidermatum）、疫霉屬：致病疫霉（Phytophthora infestans）或煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）、指梗霉屬：粟白發(fā)病菌（Sclerospora graminicola）、單軸霉屬：葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola）、霜霉屬：十字花科植物霜霉病菌（Peronospora parasitica）、白銹屬：十字花科蔬菜白銹病菌（Albugo candida）等病原形態(tài)觀察及所致病害癥狀觀察；水霉和腐霉游動孢子形成和釋放的錄相觀看等。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、CD機、多媒體課件等）、冰箱、生化培養(yǎng)箱、顯微鏡、實體顯微鏡、各種類型的病害標本、幻燈片和掛圖等。擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、小木塊、吸水紙、酒精燈、火柴等。

實驗四接合菌門菌物及所致病害

1．目的要求

認識接合菌門菌物的一般形態(tài)及其所致病害的癥狀類型，了解異宗配合與同宗配合的含義及同型配子囊、異型配子囊的差別。

2．實驗內(nèi)容

甘薯軟腐病菌（Rhizopus stolonifer）、犁頭霉（Absidia sp.）、毛霉（Mucor sp.）、“+、-”菌株的斜面培養(yǎng)物或培養(yǎng)皿平板培養(yǎng)物的病原形態(tài)特征；甘薯軟腐病新鮮標本的癥狀觀察。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）、冰箱、生化培養(yǎng)箱、顯微鏡、實體顯微鏡、各種類型的病害標本、幻燈片和掛圖等。擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、小木塊、吸水紙、酒精燈、火柴等。

實驗五子囊菌門菌物及所致病害

1．目的要求

認識子囊菌門各個綱病原菌的形態(tài)特征，掌握子囊菌各主要屬的分類依據(jù)及所致主要病害的癥狀。

2．實驗內(nèi)容

外囊菌屬（Tapharina）、白粉菌目（Erysiphales）各主要屬、長喙殼屬（Ceratocystis）、赤霉屬（Gibberella）、黑腐皮殼屬（Valsa）、頂囊殼屬（Gaeumannomyces）、麥角菌屬（Claviceps）、多腔菌屬（Myriangium）、球腔菌屬（Mycosphaerella）、格孢腔菌屬（Pleospora）、核盤菌屬（Sclerotinia）等病原形態(tài)觀察及所致病害癥狀觀察。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）、冰箱、生化培養(yǎng)箱、顯微鏡、實體顯微鏡、各種類型的病害標本、幻燈片和掛圖等。擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、小木塊、吸水紙、酒精燈、火柴等。

實驗六擔子菌門菌物及所致病害

1．目的要求

認識擔子菌門中主要病原菌的形態(tài)特征及其所致病害的癥狀類型，掌握分類根據(jù)，尤其是銹菌目、黑粉菌目各主要屬的形態(tài)特征典型生活史。了解擔子菌門菌物子實體的復(fù)雜性。

2．實驗內(nèi)容

柄銹菌屬（Puccinia）、單孢銹菌屬（Uromyces）、膠銹菌屬（Gymnosporangium）、層銹菌屬（Phakopsora）、多孢銹菌屬（Phragmidium）、疣雙孢銹菌屬（Tranzschelia）、柵銹菌屬（Melampsora）、黑粉菌屬（Ustilago）、條黑粉菌屬（Urocystis）、葉黑粉菌屬（Entyloma）、腥黑粉菌屬（Tilletia）、粒黑粉菌屬（Neovossia）、實球黑粉菌屬（Doassansia）、軸黑粉菌屬（Sphacelotheca）等病原形態(tài)觀察及所致病害癥狀觀察。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）、冰箱、生化培養(yǎng)箱、顯微鏡、實體顯微鏡、各種類型的病害標本、幻燈片和掛圖等。擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、小木塊、吸水紙、酒精燈、火柴等。

實驗七半知菌類菌物及所致病害

1．目的要求

通過半知菌中各類型代表菌的觀察，了解半知菌的分類依據(jù)，掌握半知菌主要屬的形態(tài)特征及其所致主要病害的癥狀特點，進一步學習和訓練徒手切片技能。

2．實驗內(nèi)容

梨孢屬（Pyricularia）、粉孢屬（Oidium）、青霉屬（Penicillium）、尾孢屬（Cercoapora）、鐮孢屬（Fusarium）、輪枝孢屬（Verticillium）、交鐮孢屬（Alternaria）、平臍蠕孢屬（Bipolaris）、內(nèi)臍蠕孢屬（Drechslera）、絲核菌屬（Rhizoctonia）、刺盤孢屬（Colletotrichum）、盤多毛孢屬（Pestalozzia）、莖點霉屬（Phoma）、大莖點霉屬（Macrophoma）、擬莖點霉屬（Phomopsis）、殼針孢屬（Septoria）、色二孢屬（Diplodia）、殼二孢屬（Ascochyta）等病原形態(tài)觀察及所致病害癥狀觀察。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）、冰箱、生化培養(yǎng)箱、顯微鏡、實體顯微鏡、各種類型的病害標本、幻燈片和掛圖等。擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、小木塊、吸水紙、酒精燈、火柴等。

實驗八植物細菌病害及其診斷

1．目的要求

為了能正確地診斷細菌病害，首先應(yīng)掌握細菌病害的癥狀特點，結(jié)合運用合適的檢查方法對病植物進行全面細致的診斷。通過對各種病害標本及照片的觀察，掌握細菌病害的各種癥狀類型，學習診斷細菌病害的常用技術(shù)，如顯微鏡檢查、革蘭氏染色等。

2．實驗內(nèi)容

馬鈴薯環(huán)腐病（Clavibacter sepedonicum）、番茄青枯病（Pseudomonas solanacearum）、大白菜軟腐病（Erwinia carotovora sp. carotovora）、甘藍黑腐病（Xanthomonas campestris pv. campestris）、水稻白葉枯病（X. oryzae pv. oryzae）、棉花角斑病（X. campestris pv. malvacearum）、小麥蜜穗病（C. tritici）、桃冠癭病菌（Agrobacteruim tumefaciens）、蘋果發(fā)根病菌（A. rhizogens）、枯草桿菌（B. subtilis，簡稱BS）、馬鈴薯瘡痂病（Streptomyces scalbies）、泡桐叢枝病（MLC）、桑萎縮病（MLO）、柑桔黃龍病（BLO）等病原形態(tài)觀察及所致病害癥狀觀察；學習植物細菌病害的診斷方法（一是根據(jù)癥狀診斷；二是顯微鏡檢查有無噴菌現(xiàn)象）；植物病原細菌的革蘭氏染色。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）、顯微鏡、擴大鏡、各種類型的細菌病害標本、幻燈片和掛圖等。擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、二甲苯、香柏油、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、小木塊、吸水紙、酒精燈、火柴、革蘭氏染液等。

實驗九植物病原細菌的形態(tài)觀察（鞭毛染色）　

1．目的要求

學習并初步掌握鞭毛染色法，了解其原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。

2．實驗內(nèi)容

用所供菌種稻白葉枯病菌（X. o. pv. oryzae）；茄青枯病菌（P.solanacearum）；白菜軟腐病菌（E. carotovora）；馬鈴薯環(huán)腐病菌（C. m. sepedonicum）；枯草桿菌（B. subtilis）進行鞭毛染色并觀察菌體形態(tài)。

2．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）、顯微鏡、擴大鏡、各種類型的細菌病害標本、幻燈片和掛圖等。擦鏡紙、浮載劑（蒸餾水或乳酚油）、二甲苯、香柏油、載玻片、蓋玻片、挑針、刀片、小木塊、吸水紙、酒精燈、火柴、鞭毛染液等。

實驗十植物病毒病害及病毒的傳染性試驗

1．目的要求

通過病毒病癥狀的觀察、病毒粒體和病組織中內(nèi)含體形態(tài)的觀察，掌握病毒病的發(fā)生特點和診斷技術(shù)；通過人工摩擦接種，學習常規(guī)的汁液接種法和關(guān)鍵技術(shù)；學習稀釋限點、致死溫度和體外存活期的測定方法，了解其基本原理及實際意義；了解鑒別寄主的鑒別作用。

2．實驗內(nèi)容

煙草花葉病毒病（TMV）、黃瓜花葉病毒病（CMV）、蠶豆萎焉病毒病（BBWV）、小麥土傳花葉病（SbWMV、WSpMV）、大麥黃矮病（BYDV）、大豆花葉病（SMV）、蕪菁花葉病（TuMV）、馬鈴薯卷葉病（PLRV）、煙草環(huán)斑病（TRSV）等病害癥狀觀察及內(nèi)含體觀察；植物病毒的抗性測定及傳染實驗。

3．主要實驗儀器設(shè)備

顯微鏡、電子顯微鏡、離心機、天平、恒溫水浴、0—100℃的溫度計、載玻片、蓋玻片、磷鎢酸負染液（2%PTA，pH6.0）、內(nèi)含體染液；4—5葉期的心葉煙、普通煙、莧色藜、千日紅、蠶豆和菜豆苗等；肥皂或肥皂水、消毒的研缽與研棒、金鋼砂或硅藻土（600目）、0.05M pH7.2的磷酸鹽緩沖液（PBS）、塑料標簽、鉛筆、噴霧器、指形管、塑料封口膜、洗瓶。小鑷子、刀片、剪刀、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、紗布、滴瓶、試管、試管架、10毫升的量筒、吸管、小培養(yǎng)皿、洗瓶、燒杯（100ml和250ml）、小紙簽、漿糊、多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）。

實驗十一植物病毒抗血清制備及血清學檢測(暫時不安排)

1．目的要求

通過植物病毒抗原及抗血清的制備，熟悉抗血清制備的全過程；學習利用血清學技術(shù)檢測植物病毒的方法。

2．實驗內(nèi)容

制備抗血清；用血清學技術(shù)檢測抗血清的方法。

3．主要實驗儀器設(shè)備

抗血清制備試劑、離心機、冰箱、注射器、40孔或96孔酶標板、酶標儀、微量取液器、洗瓶、10ml，100ml量筒、10ml，100ml，500ml燒杯、50ml三角瓶、研缽、記號筆、小塑料袋、小試管、水浴鍋、小培養(yǎng)皿、打孔器、多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）等。

實驗十二植物病原線蟲和寄生性高等植物

1．目的要求

識別主要植物線蟲病的癥狀和病原線蟲的形態(tài)特征。學會識別常見的寄生性植物種類、寄生方式和特點。

2．實驗內(nèi)容

粒線蟲屬（Anguina）、莖線蟲屬（Ditylenchus）、滑刃線蟲屬（Aphelenchoides）、胞囊線蟲屬（Heterodera）、根結(jié)線蟲屬（Meloidogyne）、外寄生線蟲各屬等的線蟲形態(tài)觀察（包括雌雄同型及異型線蟲。注意觀察頭部的口針、食道、腸、雄蟲尾部的交合刺、交合傘及雌蟲陰門和肛門等）及所致病害的癥狀觀察。半寄生如桑寄生屬（Loranthus）的樟寄生（Loranthus sp.）、槲寄生（Viscum sp.）、矮生槲寄生（Arceuthobium sp.），全寄生如旋花科的菟絲子（Cuscuta spp.）。列當科的列當（Orobanche spp.）與野菰（Aeginetia sp.），樟科的無根藤（Cassytha sp.），玄參科的獨腳金（Striga sp.）等植物的形態(tài)及寄生結(jié)構(gòu)的觀察。

3．主要實驗儀器設(shè)備

多媒體設(shè)備（投影儀、影碟機、多媒體課件等）、雙目解剖鏡、顯微鏡、寄生性線蟲病的危害狀標本或幻燈片、線蟲固定液、擴大鏡、載玻片、蓋玻片、篩子、竹挑針、單面刀片、蒸餾水、乳酚油及棉蘭乳酚油或計數(shù)皿、酒精燈、火柴、擦鏡紙、吸水紙等。

五、實驗報告的格式

第一學期實驗報告主要是通過觀察繪制主要植物病原菌形態(tài)草圖及簡單的文字敘述，一般要求當堂完成。

第二學期植物病理學實驗研究基本方法和基本技能訓練，觀察記載實驗結(jié)果并進行結(jié)果分析。

六、本課程考核方式、方法及實驗成績評定方法

第一學期實驗成績的評定，主要根據(jù)學生每次實驗課的實驗操作動手能力和分析問題能力、實驗課認真程度、完成作業(yè)及課堂提問情況等綜合評定成績，按百分制計分。

第二學期實驗成績的評定，主要根據(jù)學生每次實驗課的態(tài)度、操作、觀察情況和實驗報告的完成情況，按百分制計分，于學期末加權(quán)平均，按權(quán)重占課程成績的50％計算。在教學實習中，將“普病”理論課內(nèi)容和實驗內(nèi)容歸納總結(jié)成不同類型的題目，包括病害診斷、基本技能、實驗操作等測試題，測試安排在第二學年6-7月教學實習中進行。教學實習考核分為口試、基本技能操作、實習報告和實習態(tài)度4部分。①口試：占10分，隨機抽簽、每人抽一題，內(nèi)容主要是實驗理論與技術(shù)；②實驗操作：占10分，學生隨機抽取試材一份，內(nèi)容絕大部分已在實驗中做過，重點考查技能的操作及熟練程度；③實習報告和實習態(tài)度占30分。要求學生在實習結(jié)束后寫出規(guī)范的實習報告，完成50份標本的采集、鑒定。結(jié)合平時實驗報告、實習態(tài)度和完成情況綜合評分。

七、實驗應(yīng)配套的主要儀器設(shè)備及臺（套）數(shù)（以一個實驗教學班為標準）

顯微鏡36臺，包括示范用鏡

解剖鏡1臺

生化培養(yǎng)箱、冰箱、烘箱、超凈工作臺各2臺

恒溫水浴槽3個

恒溫搖床、離心機各3臺

移液槍1ml、5ml各2支

高壓滅菌鍋、紫外分光光度計各1臺

植物顯微玻片制作工具（尖頭鑷子、解剖刀、解剖針、瓷盤等）30套

標本采集工具（標本紙、標本夾、鐵鏟等） 30套

附：教學參考書目

1、許志剛主編. 普通植物病理學（第四版）. 北京: 高等教育出版社, 2009

2、許志剛主編. 普通植物病理學實驗指導（第二版）. 北京：高等教育出版社，2008

3. 孫廣宇等主編. 植物病理學實驗技術(shù). 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2002

4、方中達主編. 植病研究法（第三版）. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1998

5、洪健, 李德葆, 周雪平主編. 植物病毒分類圖譜. 北京: 科學出版社, 2001

6、陸家云. 植物病原真菌學. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2001

7、劉維志主編. 植物病原線蟲學. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2000

6、王金生主編. 植物病原細菌學. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2000

8、任欣正等. 植物病原細菌的分類與鑒定. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1994

9、邢來君等. 普通真菌學. 北京: 高等教育出版社, 1999

10、喻章等. 菌物學基礎(chǔ). 北京: 氣象出版社, 1999

11、張中義等. 植物病原真菌學. 成都: 四川科學技術(shù)出版社, 1987

12、宋兆鋒等. 植物病理學原理. 北京: 中國農(nóng)業(yè)科技出版社, 2002

13、Agrios, G N. Plant Pathology (5 th.ed), Burlington, MA, USA: Academic Press, 2005

14、Ainsworth G C, Sparrow F K, Sussman A S. The Fungi and Advanced Treatise. Vol. IV A.

Academic Press, New York, USA, 1973

15、Holt, J. G Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (9th ed.) Wilkins USA, 1994

16、Krieg N R. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology 1984, Vol 1, 2

17、 Mayo MA and Brunt, AA. The current state of plant virus taxonomy. Molec. Plant Pathol., 2001, 2: 97-100

18、Van Regrnmortel MHV, et al. Virus Taxonomy. 7th Report of the ICTV. New York: Academic Press, 2000